RESUMO: O presente estudo teve por objetivo avaliar os efeitos da suplementação mineral com diferentes concentrações de selênio (Se) sobre a integridade de DNA espermático de ovinos. Utilizaram-se 30 machos, com 10 meses de idade. Eles foram mantidos em sistema intensivo, sendo alimentados com feno e ração própria para ovinos, divididos em baias (5 m x 3 m), com cochos e água ad libitum. Os ovinos do grupo 1 (G1=controle negativo) receberam suplementação de sal mineral sem a adição de Se, os animais do G2 receberam a mesma mistura mineral, porém com 5 mg de Se (selenito de sódio)/kg mistura mineral, os ovinos do G3 receberam 10 mg Se/kg mistura, os animais do G4 receberam 15 mg Se/kg mistura, os do G5 receberam 20 mg Se/kg mistura. Os ovinos de todos os grupos passaram por um período de adaptação de 14 dias, seguido por um período de tratamento de 56 dias. O sêmen foi colhido por meio de eletroejaculação. A integridade do DNA espermático foi avaliada por meio do teste de cometa. O modelo experimental utilizado foi Quadrado Latino 5 x 5, com cinco grupos e cinco períodos experimentais. A diferença entre as médias foi analisada pelo teste de Tukey, com 5% de nível de significância. O grupo controle (G1) apresentou elevada porcentagem de danos quando comparada aos demais grupos de tratamentos (G2 a G5). Portanto, a suplementação de Se diminui o nível de danos ao DNA espermáticos, sugerindo que o Se pode exercer efeitos protetores sobre o DNA dos espermatozoides de ovinos.

ABSTRACT: In the present study, we aimed to evaluate the effects of different concentrations of selenium (Se) ovine nutritional supplementation on spermatozoa DNA integrity. Thirty male ovines (age: 10 months) were used. They were fed with hay and ram food in an intensive system, which was divided into stalls (5 m long and 3 m wide) with feeding troughs, and had ad libitum access to food and water. Ovines in group 1 (G1, the negative control) received mineral salt supplementation without Se; ovines in G2 received the same mineral salt mixed with 5 mg Se (as sodium selenite)/kg mineral supplement;ovines in G3 received 10 mg Se/kg mineral supplement; ovines in G4 received 15 mg Se/kg mineral supplement; and ovines in G5 received 20 mg Se/kg mineral supplement. Ovines in all groups remained untreated for 14 days, followed by a treatment period of 56 days. Semen samples were obtained by electroejaculation. The DNA damage in semen samples was evaluated using the comet assay. The experimental design was implemented using a 5 × 5 Latin Square, i.e., five treatments and five experimental periods. The mean differences were compared using Tukey’s test at a significance level of 5%. The control group (G1) showed a high percentage of DNA damage compared to the Se-treated groups (G2-G5). Therefore, Se supplementation could decrease the basal level of DNA damage in sperm cells, suggesting that Se might exert protective effects on sperm DNA.

Clareamento dental é um procedimento simples e conservador para restaurar esteticamente a cor de dentes vitais e não-vitais. Entretanto, alguns estudos têm demonstrado o risco de dano tecidual a partir do contato desses agentes com a mucosa bucal. Neste presente estudo, o potencial genotóxico associado à exposição aos agentes clareadores dentais foi avaliado pelo teste de células individualizadas em gel (teste do cometa) in vitro. Células de ovário de hamster chinês (CHO) in vitro foram expostas a seis agentes clareadores dentais comercialmente disponíveis (Clarigel Gold - Dentsply; Whitespeed - Discus Dental; Nite White - Discus Dental; Magic Bleaching - Vigodent; Whiteness HP - FGM e Lase Peroxide - DMC). Os resultados mostraram que todos os agentes clareadores testados contribuíram para os danos no DNA, como demonstrado pela média do momento da cauda, sendo o efeito mais forte observado na mais alta dose de peróxido de hidrogênio (Whiteness HP e Lase Peroxide, na concentração de 35%). Por outro lado, Magic Bleaching (Vigodent) induziu o menor nível de quebras no DNA. Os controles negativo e positivo apresentaram ausência e presença de danos no DNA, respectivamente. Em suma, esses resultados sugerem que os agentes clareadores dentais podem ser um fator que aumenta o nível de danos no DNA. Uma concentração de peróxido de hidrogênio mais elevada produziu atividades nocivas mais severas no genoma como detectado pelo teste do cometa.

Dental bleaching is a simple and conservative procedure for aesthetic restoration of vital and non-vital discolored teeth. Nevertheless, a number of studies have demonstrated the risk of tissue damage from the contact of these agents with the oral mucosa. In the current study, the genotoxic potential associated with exposure to dental bleaching agents was assessed by the single cell gel (comet) assay in vitro. Chinese hamster ovary (CHO) cells in vitro were exposed to six commercial dental bleaching agents (Clarigel Gold - Dentsply; Whitespeed - Discus Dental; Nite White - Discus Dental; Magic Bleaching - Vigodent; Whiteness HP - FGM and Lase Peroxide - DMC). The results pointed out that all dental bleaching agents tested contributed to DNA damage as depicted by the mean tail moment, being the strongest effect observed with the highest dose of hydrogen peroxide (Whiteness HP and Lase Peroxide, at a 35% concentration). On the other hand, Magic Bleaching (Vigodent) induced the lowest level of DNA breakage. Negative and positive controls displayed absence and presence of DNA-damaging, respectively. Taken together, these results suggest that dental bleaching agents may be a factor that increases the level of DNA damage. A higher concentration of hydrogen peroxide produced higher noxious activities in the genome as detected by single cell gel (comet) assay.

O flúor tem sido amplamente usado na Odontologia, pois é um agente profilático efetivo e específico contra a cárie dentária. Entretanto, o flúor em excesso pode representar perigos à saúde humana, especialmente por causar agressão ao material genético. Testes de genotoxicidade constituem uma parte importante da pesquisa do câncer para a avaliação de risco de possíveis carcinógenos. Neste estudo, danos ao DNA associados à exposição ao flúor foram avaliados pelo teste de células individualizadas em gel de agarose (teste do cometa) in vitro. Células de linfoma murino e fibroblastos humanos foram expostas ao fluoreto de sódio (NaF) nas concentrações finais de 7 a 100 µg/mL durante 3 h a 37ºC. Os resultados mostraram que o NaF não contribuiu para os danos ao DNA em ambos os tipos celulares estudados e em todas as concentrações testadas, conforme demonstrado pelas médias do momento da cauda e intensidade da cauda dos cometas. Estes achados são clinicamente importantes, uma vez que representam uma importante contribuição para a avaliação do risco potencial à saúde associada à exposição a agentes geralmente empregados na prática odontológica.

Fluoride has widely been used in Dentistry because it is a specific and effective caries prophylactic agent. However, excess fluoride may represent a hazard to human health, especially by causing injury on genetic apparatus. Genotoxicity tests constitute an important part of cancer research for risk assessment of potential carcinogens. In this study, the potential DNA damage associated with exposure to fluoride was assessed by the single cell gel (comet) assay in vitro. Mouse lymphoma and human fibroblast cells were exposed to sodium fluoride (NaF) at final concentration ranging from 7 to 100 µg/mL for 3 h at 37ºC. The results pointed out that NaF in all tested concentrations did not contribute to DNA damage as depicted by the mean tail moment and tail intensity for both cellular types assessed. These findings are clinically important because they represent a valuable contribution for evaluation of the potential health risk associated with exposure to agents usually used in dental practice.

O flúor tem sido amplamente usado na Odontologia, pois é um agente profilático efetivo e específico contra a cárie dentária. Entretanto, o flúor em excesso pode representar perigos à saúde humana, especialmente por causar agressão ao material genético. Testes de genotoxicidade representam uma importante parte da pesquisa do câncer para a avaliação de risco de possíveis carcinógenos. Neste presente estudo, danos ao DNA associados à exposição ao flúor foram avaliados pelo teste de células individualizadas em gel de agarose (teste do cometa) in vitro. Células de ovário de hamster chinês foram expostas ao fluoreto de sódio (NaF) nas concentrações finais de 7 a 100 µg/ml, durante 3 h, a 37°C. Os resultados mostraram que o NaF não contribuiu para os danos no DNA em todas as concentrações testadas, conforme demonstrado pelas médias do momento da cauda e da intensidade da cauda dos cometas. Esses achados são clinicamente importantes, uma vez que representam uma importante contribuição para a correta avaliação do potencial risco à saúde associada à exposição aos agentes odontológicos.

Fluoride has been widely used in dentistry because it is a specific and effective caries prophylactic agent. However, excess fluoride may represent a hazard to human health, especially by causing injury to genetic material. Genotoxicity tests represent an important part of cancer research to assess the risk of potential carcinogens. In the current study, the potential DNA damage associated with exposure to fluoride was assessed by the single cell gel (comet) assay in vitro. Chinese hamster ovary cells were exposed to sodium fluoride (NaF) at final concentration ranging from 7 to 100 µg/ml for 3 h, at 37°C. The results pointed out that NaF in all concentrations tested did not contribute to DNA damage as depicted by the mean tail moment and tail intensity. These findings are clinically important since they represent an important contribution to a correct evaluation of the potential health risk associated with the exposure to dental agents.

A infecção pelo Helicobacter pylori (H. pylori) induz inflamação persistente na mucosa gástrica com diferentes lesões orgânicas em humanos, tais como gastrite crônica, úlcera péptica e câncer gástrico. Os fatores determinantes desses diferentes resultados incluem a intensidade e a distribuição da inflamação induzida pelo H. pylori na mucosa gástrica. Evidências recentes demonstram que cepas do H. pylori apresentam diversidade genotípica, cujos produtos acionam o processo inflamatório por meio de mediadores e citocinas, que podem levar a diferentes graus de resposta inflamatória do hospedeiro, resultando em diferentes destinos patológicos. Cepas H. pylori com a ilha de patogenicidade cag induzem resposta inflamatória mais grave, através da ativação da transcrição de genes, aumentando o risco para desenvolvimento de úlcera péptica e câncer gástrico. O estresse oxidativo e nitrosativo induzido pela inflamação desempenha importante papel na carcinogênese gástrica como mediador da formação ou ativação de cancerígenos, danos no DNA, bem como de alterações da proliferação celular e da apoptose.

Helicobacter pylori (H. pylori)-infection causes persistent inflammation with different clinical outcomes in humans, including chronic gastritis, peptic ulcer, and gastric cancer. The key determinants of these outcomes are the severity and distribution of the H. pylori-induced inflammation. Recent evidence has demonstrated that H. pylori strains possess genotypic diversity whose products trigger inflammatory process and the main mediators and cytokines, which may engender differential host inflammatory responses with distintict clinical outcomes. H. pylori strains that possess the cag pathogenecity island induce more severe inflammation via activation of gene transcription, thus enhancing the risk for peptic ulcer and distal gastric cancer. The oxidative and nitrosative stress induced by inflammation plays an important role in gastric carcinogenesis as a mediator of carcinogen formation, DNA damage, and imbalances between cell proliferation and apoptosis.

O teste padrão para identificar o potencial cancerígeno de compostos químicos é o estudo de longa duração em roedores, não realizado no Brasil. Nosso laboratório estabeleceu um teste alternativo de média duração (ensaio DMBDD), baseado no paradigma iniciação-promoção da carcinogênese química, adotado pelo Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renováveis (Ibama) como fonte oficial de evidências de carcinogenicidade. Nosso objetivo foi avaliar alterações nos éxons 5 a 8 do gene supressor tumoral TP53 e éxons 1 e 2 dos oncogenes H-RAS e K-RAS em lesões hepáticas neoplásicas e pré-neoplásicas observadas no ensaio DMBDD. A identificação dessas eventuais alterações moleculares permitirá o reconhecimento de um possível padrão de alteração em genes críticos, bem como poderão sugerir mecanismos de ação das substâncias testadas no protocolo DMBDD. Sessenta ratos wistar machos foram separados em três grupos: o grupo I não foi tratado quimicamente; o grupo II recebeu os cinco agentes iniciadores da carcinogênese (DMBDD); o grupo III recebeu a iniciação DMBDD seguida de promoção por Fenobarbital. Amostras de DNA (obtidas após avaliação histopatológica de fígado fixado em formalina e incluído em parafina) foram submetidas à técnica da PCR-SSCP (single strand conformation polymorphism). Não foram detectadas mudanças no padrão de bandeamento da SSCP nos diferentes grupos experimentais em nenhum dos éxons estudados. Os resultados sugerem que, em fígado de ratos Wistar machos, mutações nos éxons 5 a 8 do gene TP53 e éxons 1 e 2 dos genes H-RAS e K-RAS não se incluem dentre as alterações moleculares precoces do processo de carcinogênese hepática induzido pelo protocolo DMBDD.

The standard protocol to evaluate the carcinogenic potential of chemicals is the long-term bioassay in rodents, not performed in developing countries due to its high cost and complex operational procedures. Our laboratory has established an alternative medium-term bioassay in Wistar rats, also called DMBDD assay, based on the paradigm initiation/promotion of chemical carcinogenesis. This method was accepted by the Brazilian Environment Agency (IBAMA) as an official source of evidence of carcinogenicity. The aim of this study was to evaluate alterations in exons 5 to 8 of the tumor suppressor gene TP53 and exons 1 and 2 of oncogenes K-RAS and H-RAS in neoplastic and preneoplastic hepatic lesions observed in DMBDD assay. The characterization of these alterations may contribute to the recognition of patterns of damage in critical genes, as well as to suggest mechanisms of action of the compounds tested in the protocol. Sixty male Wistar rats were separated into 3 groups: the first was treated with no chemicals; the second received five initiating agents and the third received initiation followed by phenobarbital. Liver DNA samples (obtained from formalin-fixed and paraffin-embedded tissues after histological analysis) were evaluated by the non-isotopic PCR-SSCP technique. No changes in any analyzed exons were detected by the PCR-SSCP banding pattern in all experimental groups. This result suggests that liver mutations in exons 5 to 8 of TP53 and exons 1 and 2 of H-RAS and K-RAS are not among the early molecular alterations occurring in the hepatic carcinogenesis process induced by the DMBDD protocol in male Wistar rats.